人工合成的纳豆激酶基因转化烟草的研究

【摘要】本研究将人工合成的纳豆激酶基因sNK和在其中插入番茄E8基因第一内含子的纳豆激酶基因sNK-E8i转化到模式植物烟草中,以期提高纳豆激酶在烟叶中的表达水平。通过正交试验得到在烟草NC89叶片中瞬时表达纳豆激酶基因的最优条件,进而在瞬时表达系统中对人工合成的sNK基因和含E8内含子的sNK-E8i基因进行mRNA水平上表达量的检测。由RT-qPCR结果可知,我们人工合成的两个纳豆激酶基因均在mRNA水平上有表达。通过农杆菌侵染的方法将两种基因稳定转化到烟草NC89中。经PCR检测,得到12株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株,初步证明目的基因已整合到烟草基因组中。RT-PCR检测有9株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株为阳性。通过RT-qPCR将两种基因在烟草中的表达量进行比较,结果表明转sNK-E8i基因的植株中纳豆激酶的表达量比转sNK基因植株高。通过纤维蛋白平板法检测其活性,共有5株转sNK基因烟草植株和3株转sNK-E8i基因烟草植株检测到溶圈,说明目的基因在部分转基因烟草中可正常转录和翻译并表现出溶栓活性。经加代培养已得到T1代转基因植株。
【作者】刘靓蕾；
【导师】哈斯阿古拉；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】纳豆激酶；人工合成；植物偏爱密码子；烟草；瞬时表达；纤维蛋白平板法；

【参考文献】
[1]张凌.媒介融合时代纸媒出路研究[D].复旦大学,新闻学,2012,硕士.
[2]任永杰.船舶振动数据采集监测网络系统的研究[D].天津大学,精密仪器及机械,2004,硕士.
[3]丁振国,陈静.基于关联规则的个性化推荐系统[J].计算机集成制造系统-CIMS,2003,10:891-893.
[4]马志昊.论我国罚金刑的完善[D].河北经贸大学,刑法学,2012,硕士.
[5]童亮.经直肠高能聚焦超声治疗局限性前列腺癌的回顾性分析[D].南方医科大学,泌尿外科,2012,硕士.
[6]刘斐.不同方案根治幽门螺杆菌疗效观察的临床研究[D].苏州大学,内科学,2013,硕士.
[7]李妍.“文化小说”的试验与探索[D].北京大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[8]谢玉鹏1,2,谭学治1,3,马琳1,3,黄昊骎1,田野1,吴海燕4.认知无线电系统中三维联合频谱分配算法[J].系统工程与电子技术.
[9]吕欢欢.面向客户需求融合的产品设计方案优选模型及应用[D].浙江工商大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[10]谢文艳.基于计算社会科学的复杂网络聚类算法研究[D].哈尔滨工程大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[11]文秀丽.浅析断句法在俄译汉中的应用[D].黑龙江大学,翻译,2013,硕士.
[12]吕文娥,江秀臣.电力市场下的逐步加线规划[J].电力系统自动化,2007,16:35-39+49.
[13]高娜.基于政治关联的过度自信对过度投资的影响研究[D].湖南大学,会计学,2014,硕士.
[14]姚雨佳,杨剑青,张晓英.大学生内隐老化刻板印象的情境效应[J].杭州师范大学学报(自然科学版),2014,06:.
[15]汤文琦.孵化温度对乌龟性别决定基因表达的影响[D].杭州师范大学,生态学,2013,硕士.
[16]何佳莹.上海市基本医疗保险异地就医费用结算现状及对策研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2012,硕士.
[17]徐忠颖.WTO绿色贸易壁垒法律问题研究[D].大连海事大学,国际法学,2004,硕士.
[18]唐大鹏.日本社会保障制度及其借鉴[D].吉林大学,世界经济,2004,硕士.
[19]桂小阳,梅生伟,卢强.多机系统水轮机调速器鲁棒非线性协调控制[J].电力系统自动化,2006,03:29-33+88.
[20]唐金金.基于运行图的高速列车群运行过程全息优化仿真方法与系统研究[D].北京交通大学,2012.
[21]王博威.新型苯并咪唑类金属离子探针的合成与性能[D].天津理工大学,药物化学,2013,硕士.
[22]赵丹.销售人员工作压力、工作满意度与离职倾向之间的关系研究[D].西北大学,劳动经济学,2013,硕士.
[23]耿玲玲.西部地区产业结构升级及其影响因素分析[D].重庆工商大学,区域经济学,2014,硕士.
[24]曹清强.人民币外汇市场压力及其冲销机制的实证研究[D].山东财经大学,数量经济学,2012,硕士.
[25]郭礼铭.CP3钛合金激光热应力校形工艺研究[D].南京航空航天大学,材料加工工程,2013,硕士.
[26]郭艳蕊.当代大学生寝室文化内容与影响因素的研究[D].安徽大学,社会学,2014,硕士.
[27]孙红秀.泡沫分离蛋白质研究[D].天津大学,化学,2013,硕士.
[28]焦剑雄.区域金融集聚、经济增长与生态效率的空间统计分析[D].南昌大学,概率论与数理统计,2014,硕士.
[29]潘海涵,汤智.大学实践教学体系的再设计[J].中国高教研究,2012,02:104-106.
[30]王传众.基于struts框架的网上书店系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[31]胡小青.挖掘内涵式服务适应高等学校扩招[J].津图学刊,2004,02:46-47+53.
[32]李慧敏.多智能体网络的牵制蜂拥控制研究[D].华东交通大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[33]刘少勇.中美小额消费纠纷仲裁解决模式比较研究[D].天津商业大学,法学理论,2013,硕士.
[34]来存良.走自主创新之路创建高效洁净示范矿井[J].煤炭经济研究.2003(05)
[35]张云丽.我国经济适用房政策执行中存在的问题及解决对策分析[D].东北师范大学,行政管理,2012,硕士.
[36]吴慧萍.中国城市化发展水平的测度及其对气温影响的灰色关联分析[D].安徽大学,应用统计,2014,硕士.
[37]齐平.卟啉LB膜的制备和性能研究[D].吉林大学,光学,2013,硕士.
[38]何维霖.原位光聚合技术制备耐刮擦有机无机杂化纳米材料的研究[D].广东工业大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[39]张辉,姜益强.带钢层流冷却装置的设计及研究[J].一重技术.2006(03)
[40]韩艳珍.毛泽东反腐败思想研究[D].西南大学,马克思主义基本原理,2014,硕士.
[41]肖化平.氮化硼—石墨烯复合纳米体系的电子结构与输运性质研究[D].湘潭大学,2012.
[42]高红艳.面对“新闻价值”本身[D].暨南大学,2002.
[43]骆武.防雷达新型三维伪装网的研究[D].北京工业大学,材料加工工程,2004,硕士.
[44]郭超.乳化剂替代部分油脂对肉鸡生产性能、养分消化率和消化酶活性的影响[D].河南科技大学,养殖（专业学位）,2014,硕士.
[45]孙婷婷.我国中小板上市公司独立审计风险防范研究[D].黑龙江大学,会计学,2013,硕士.
[46]吕强,周忠彬,李顺飞.医院网络环境下的数据采集方法[J].实用医药杂志,2004,10:937.
[47]包财花.高中地理教材中数学知识的研究[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[48]卜伟,李剑桥,徐黄华.我国制造业发展与其教育关联性研究[J].宏观经济研究,2014,10:71-84.
[49]赵磊,赵柏衡,常胜,王豪,黄启俊.石墨烯纳米带场效应管结构优化[J].微纳电子技术,2013,08:474-478+522.
[50]葛玉辉.基于小波神经网络的水汽预报方法研究[D].西南交通大学,大地测量学与测量工程,2014,硕士.